尖锐湿疣常用的诊断方法

尖锐湿疣常用的诊断方法 一、醋酸白试验用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟，病灶部位变白稍隆起，肛门病损可能需要15分钟。本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果，HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的不同，只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检测HPV的敏感性很高，它比常规检测观察组织学变化还好。但偶尔在上皮增厚或外伤擦破病例中出现假阳性、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC提示，醋酸白试验并不是特异试验，且假阳性较常见。

二、免疫组织学检查常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法(即PAP)，显示湿疣内的病毒蛋白，以证明疣损害中有病毒抗原。HPV蛋白阳性时，尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。

三、组织化学检查取少量病损组织制成涂片，用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损中有病毒抗原，则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)方法中，核可被染成红色。此法特异性强且较迅速，对诊断有帮助。

四、病理检查主要为角化不全，棘层高度肥厚，乳头瘤样增生，表皮突增厚，延长，其增生程度可似假性上皮瘤样。刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂、颇似癌变。但细胞排列规则，且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大，胞浆着色淡、中央有大而圆，深嗜碱性的核。通常真皮水肿、毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润。Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣，表皮极度向下生长，代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混，故须多次活检。若有缓慢发展之倾向，则为一种低度恶变的过程，即所谓疣状癌。

五、基因诊断迄今，HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测，主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点，为HPV检测开辟了新途径。(一)标本的采集及处理1.标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS离心(3000g，10min)洗涤2次，沉积细胞重悬于1mlPBS中，取0.5ml细胞悬液抽提DNA。2.标本核酸的提取：按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/LTris-HCl，pH7.4，10mmol/LEDTA，150mmol/LNaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下处理过夜;且等体积酚/氯仿(1:1)，氯仿/异戊醇(24:1)各抽提2次;加1/10体积3mol/LNaAc(pH5.2)及2.5倍体积无水乙醇置-20℃2h或过夜沉淀DNA;加1体积乙醇洗涤1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/LTris-HCl，pH8.0，1.0mmol/LEDTA)溶解DNA，37℃温育30min。(二)PCR扩增1.引物设计和合成：HPV基因组可分为早期区(E)和晚期区(L)，每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明，各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1，该引物与HPV6、11、16、18及33型有互补序列，也可扩增其它型HPV。2.PCR反应试剂：TaqDNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/LdNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L)，10×PCR缓冲液(500mmolKCl、40mmol/LMgCl2、100mmol/LTris-HCl、pH8.5)，100μmol/LMY11和MY09贮备液，灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。3.PCR扩增方法和程序：以100μlPCR反应液,用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。(1)实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。每支反应管中含有的PCR反应试剂(2)各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。

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