宫颈糜烂与生殖道人乳头瘤病毒感染关系

宫颈糜烂与生殖道人乳头瘤病毒感染关系 作者：李明成，张晓英，郑华

【摘要】目的探讨女性生殖道感染人乳头瘤病毒基因类型及与子宫颈糜烂关系，为宫颈癌防治提供依据。方法收集454份子宫颈糜烂标本，分成尖锐湿疣(CA)组和非CA组，采用免疫组化法和PCR技术检测人乳头瘤病毒(HPV)基因类型。结果免疫组化法检测宫颈糜烂感染HPV阳性率，CA组为67.8%，非CA组为47.7%。PCR检测宫颈糜烂Ⅰ°、Ⅱ°、Ⅲ°感染HPV阳性率，CA组Ⅰ°55.5%，Ⅱ°64.7%，Ⅲ°83.3%。非CA组Ⅰ°32.8%，Ⅱ°49.6%，Ⅲ°62.3%。HPV-DNA类型以6，11，16，18，58，45，33型为主。结论本地区宫颈糜烂患者有较高的HPV感染率，并与糜烂程度呈正相关，监测和控制女性生殖道HPV感染对宫颈癌防治具有重要意义。

【关键词】人乳头瘤病毒;尖锐湿疣;宫颈糜烂

基金项目：吉林省科技发展计划项目(20050702-7)

Studyonhumanpapillomavirusinfectionassociationwithcervicalerosionamongfemalecongentialtract

LIMing?Cheng，ZHANGXiao?ying,ZHENGHua.

MedicalCollegeofBeihuaUniversity(Jilin132013，China)

Abstract：-iveToexplorethegenotypeanddistributionofhumampapillomavirusesamongcervicalerosionpatients，andtoguidethepreventingandtreatingcancerofuterinecervix.MethodsThecervicalerosionspecimenswerecollectedanddividedintotwogroups,theCAgroupandno-CAgroup.TheimmunohistochemistryassayandPCRtechniquewereusedtodetectthegenotypesofHPV-DNA.ResultsThe76cases(67.8%)inCAgroupandthe163cases(47.7%)inno-CAgroupwereconfirmedtobeHPV-DNApositive.ThepositiveratesofHPVwereⅠ°55.5%,Ⅱ°64.7%andⅢ°83.3%inCAgroup;andⅠ°32.8%,Ⅱ°49.6%andⅢ°62.3%innon-CAgroupamongcervicalerosionpatientsrespectively.ThegenotypeofHPV-DNAwas6,11,16,18,58,45and33.ConclusionThereishigherincidenceofHPVamongcervicalerosionpatientsintheregion,andtheincidenceofHPVhasapositiveassociationwiththecervicalerosiondegrees.ItisofparamountimportancetocontrolHPVinfectionandtreatcervicalerosioneffectivelyforpreventingandtreatingcancerofuterinecervix.

Keywords：humanpapillomavirus;condyloma

acuminatum;cervicalerosion

近年来，越来越多的研究表明，病毒感染是宫颈糜烂的主要原因之一〔1〕。其中，人乳头状瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)的感染与宫颈糜烂的发生发展直接相关。HPV感染引起的尖锐湿疣(condylomaacuminatum,CA)是以生殖器、会阴和肛门为主要部位的最常见性传播疾病之一。HPV具有高度组织和宿主特异性。生殖器HPV感染有临床感染、亚临床感染和潜伏感染。临床常见的CA即为临床感染的表现，症状隐匿的亚临床感染病变不典型，需借助阴道镜检查及醋酸白试验来发现和诊断，而此型更具传染性，医学研究表明，宫颈HPV亚临床感染与宫颈癌的发生关系密切〔2〕。为了解吉林地区子宫颈糜烂患者HPV感染及基因类型分布，本研究采用免疫组化法和PCR技术对454例子宫颈糜烂患者感染HPV基因类型进行检测。现将结果报告如下。

1对象与方法

1.1临床资料

取自2004年1月～2006年8月期间吉林市区三级甲等医院妇科门诊确诊宫颈糜烂患者454份标本。临床症状：白带增多，呈淡黄色脓性或带有血性，伴有腰骶酸痛及盆腔下坠痛和痛经。妇科检查：阴道分泌物多，宫颈呈不同程度的糜烂。112例女性患者在阴道镜下可见外阴、阴道及肛门周围出现大小不等、数量不一的乳头瘤状、菜花状或鸡冠状增生物;其中85例疣体位于外阴及阴道壁等处，27例在宫颈口出现疣体;醋酸白试验后可见增生物变白，乳头直立，基底融合，久不消退，符合CA诊断标准〔2〕。342例没有阴道镜可见的疣体。年龄18～72岁，平均32.1岁，病程2d～2月，平均27d。受检取材者均在15d内未用抗HPV药物。

1.2试剂

TaqDNA聚合酶(5u/μl)、dNTPs(大连TaKaRa公司)。链霉素抗生物-过氧化物酶(SP)超敏试剂盒和二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)。人乳头瘤病毒(HPV通用型)单克隆抗体(美国CHEMICON公司)。

1.3取材方法

外阴常规消毒，放入阴道窥器，将棉拭子(或刮板)沿宫颈鳞-柱上皮交接处顺时针旋转2～3圈，涂布在经多聚赖氨酸处理过的载玻片上，干燥，放入100%丙酮，4℃固定10min;涂布后的棉拭子置于1ml生理盐水混匀，置于-80℃冰箱保存。疣体活组织用血管钳摘取适量，放置保存液保存，用于组织病理学检查。

1.4免疫组化法检测HPV

采用亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法(avidinbiotinperoxidasecomplex，ABC)检测宫颈糜烂感染HPV。按试剂盒方法操作进行，判断标准为HPV定位于胞核，胞核染为棕黄色为阳性。

1.5PCR检测HPV-DNA类型

1.5.1引物设计

根据GenBank公布的HPV-DNA序列，设计12对HPV分型特异性引物，由大连TaKaRa公司合成。

1.5.2DNA模板的制备

将标本从-80℃冰箱内取出转移至1.5mlEppendorf管中，挤干棉拭子中的水分，10000r/min离心5min，弃尽上清，在沉淀中加入50μlDNA提取液充分混匀，100℃水浴10min，10000r/min离心5min，取上清2μl进行PCR反应。

1.5.3PCR反应

在50μl反应体系中，加入Buffer、dNTPs、引物、Taq-DNA聚合酶、模板等，经40个循环后取10μlPCR产物与2μl缓冲液混匀，在20g/L琼脂糖凝胶中电泳30min，紫外线灯下观察结果，出现与阳性对照平行的DNA带为阳性。

1.6统计分析

采用SPSS软件进行分析。

2结果

2.1CA疣体组织病理学诊断

112例CA发生于会阴、阴道前庭、宫颈及肛门周围，呈菜花状、丘疹样、扁平头斑块状的生殖器疣，呈外向性生长，增生的乳头小而密集，表层细胞有角化不全或过度角化;基底层和棘细胞层增生，表皮浅层或浅中层可见有特征性的灶性分布的核周空穴细胞。

2.2免疫组化法检测2组宫颈糜烂感染HPV阳性率

CA组HPV阳性率为67.8%，非CA组HPV阳性率为47.7%(χ2=13.8，P

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